间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒

间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒
使用说明书

       间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒是我们自主研发的一款用于间充质干细胞成脂诱导分化的试剂盒，可用于多种组织来源的间充质干细胞的成脂诱导分化，比如骨髓、脐带以及脂肪等间充质干细胞。该产品只能用于科学研究，不能用于临床诊断、以及其他的用途。

产品组分

 操作步骤
一、间充质干细胞成脂诱导分化培养基的准备
1. 本产品为试剂盒，使用前需将试剂盒内各成分试剂于4°C解冻，直至完全溶解后，将各试剂组分按照顺序混匀。
2. 为了保证试剂的使用效果，请将低于200 μl的添加剂EP管进行短暂离心，使试剂全部收集至管底，并用少量培养基溶液多次洗涤管子，很大程度降低添加剂成分的损失。
3. 按照上表首先进行间充质干细胞维持培养基的配制，即将维持培养添加剂I和维持培养添加剂II全部加入到间充质干细胞**培养基中，混合均匀后做好标识为“维持培养基MC1”即可，置于2-8°C保存。
4. 然后从步骤3中配制好的维持培养基中取出20ml，然后分别将诱导成脂分化添加剂III、诱导成脂分化添加剂IV以及诱导成脂分化添加剂V全部加入到20ml维持培养基中，混合均匀，并用少量培养基多次洗涤管子，以保证培养基的效果，做好标识为“诱导成脂分化培养基MC2”即可，置于2-8°C保存。
二、间充质干细胞成脂诱导分化操作指导步骤
1. 将接种好的间充质干细胞置于37°C，5%CO2培养箱中进行培养。建议以2-3×10^4 cells/cm2的细胞密度接种于六孔板中。每孔加入2ml的干细胞专属培养基。
注意：间充质干细胞的培养需要专属的培养基以保证干细胞的全能性及分化潜能。
2. 当细胞融合度达到符合预期时，小心将孔内的培养基全部吸走，向六孔板中加入2ml 诱导成脂分化培养基MC2，进行诱导。

3. 96小时后（第四天）撤去诱导成脂分化培养基MC2，用37°C预热的1×PBS缓冲液洗涤细胞表面2次后，替换为维持培养基MC1继续培养细胞，并每三天换液（MC1）一次，直至脂滴变得足够大而饱满，即可结束诱导。一般而言，至第14天时，80%以上的细胞将分化成成熟的脂肪细胞。

4. 仔细观察细胞诱导分化的过程，并记录细胞分化情况，根据实验需求对细胞进行染色和后续鉴定。
三、油红O染色液的使用
当您的成脂诱导实验结束后，可进行油红O染色确定诱导效果（本公司提供油红O染色试剂盒）
1. 吸走孔板里的培养基后，用1×PBS缓冲液冲洗细胞2次。
2. 加入4%中性甲醛溶液（覆盖细胞表面即可），室温固定细胞30分钟。
3. 细胞固定期间，可配制油红O工作液。配制方法如下：油红O溶液：蒸馏水=3：2，混匀后用中性滤纸过滤备用。
4. 吸走甲醛溶液，用1×PBS缓冲液冲洗2遍。
5. 以六孔板为例，每孔加入1ml油红O工作液，室温染色30分钟。
6. 吸走油红O工作液，用1×PBS缓冲液冲洗2遍，把背景杂质洗干净，即可在显微镜下观察诱导和染色效果。